Методика определения групп крови и резус-фатора

Ведущие специалисты в области гематологии

Проф.Круглов С.В. и Крючкова О.А.

Проф.Круглов С.В. и Крючкова О.А.

Автор проекта: Круглов Сергей Владимирович, профессор, заслуженный врач России, доктор медицинских наук, врач высшей квалификационной категории

Подробнее

Запись на прием


 

Редактор страницы: Крючкова Оксана Александровна — врач-травматолог-ортопед

Подробнее


Шатохин Юрий Васильевич

Профессор Шатохин Юрий Васильевич

ДМН, Зав. кафедрой гематологии РостГМУ.

Подробнее / Отзывы


Лысенко Ирина БорисовнаПрофессор Лысенко Ирина Борисовна

ДМН, Зав. отд. гематологии Ростовского Онкологического Института.

Подробнее / Отзывы


Снежко Ирина ВикторовнаСнежко Ирина Викторовна

Кандидат медицинских наук Ассистент кафедры гематологии РостГМУ Врач высшей квалификационной категории.

Подробнее / Отзывы


Шамрай Владимир СтепановичШамрай Владимир Степанович

Врач высшей квалификационной категории, заведующий гематологическим отделом.

Подробнее / Отзывы



 

Методика определения групп крови и резус-фатора

Каждому практическому врачу важно знать все детали точного определения групп крови, а также возможные ошибки. При этом следует подчеркнуть необходимость повторного определения групп крови донора и реципиента самим врачом, производящим трансфузию. Ни в коем случае определение группы крови не следует передоверять другому лицу, так как за исход трансфузии несет ответственность врач, производящий эту операцию.

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (двух различных серий), а у первичных доноров я в сомнительных случаях — также по стандартным эритроцитам.

Определение групп крови по стандартным сывороткам

Определение групп крови по стандартным сывороткам должно производиться строго по инструкции. Малейшее отступление от правил определения группы крови ведет к крупным, иногда роковым ошибкам.

Удобнее всего группы крови определять на белых фарфоровых тарелках.

Около этих надписей пипеткой помещают по 2 капли соответствующих сывороток различных серий, при каждом определении групп крови пользуются тремя стандартными сыворотками двух различных серий (не обязательно совпадающих по своему титру). При этом результаты исследования с сыворотками обеих серии должны совпадать. Капли сывороток обеих серий можно располагать на одной тарелке. Можно проводить исследование с тремя каплями 0(1), А(II) и В(III) групп на одной тарелке с сыворотками одной серии и на другой тарелке — с сыворотками другой серии.

После обработки мякоти пальца спиртом и высушивания спирта стерильной ватой производят прокол кожи пальца иглой Франка. Тонкой стеклянной палочкой с утолщением на конце берут маленькую каплю крови и смешивают с сывороткой 0(1) в пропорции приблизительно 1 : 10. После этого конец стеклянной палочки опускают в банку с физиологическим раствором и тщательно высушивают. Затем опять берут каплю крови и смешивают с сывороткой А (II). Другим концом стеклянной палочки прибавляют кровь к сыворотке

Обязательно при каждом определении групп крови

после смешивания капель сыворотки с исследуемой кровью через 5 минут добавлять одну каплю физиологического раствора к каждой из капель смеси сывороток с кровью. Это требуется для того, чтобы устранить.

Обычно агглютинация наступает через минуту и к 3 минутам бывает закончена. Однако для исключения ошибок при поздней агглютинации следует выжидать до 5 минут и только тогда делать заключение.

Схема агглютинации со стандартными сыворотками изображена на рис. 2.

Практически результаты, агглютинации можно пред ставить в следующем виде, агглютинация не наступила ни в одной из трех сывороток — кровь не содержит агглютиногенов и таким образом принадлежит 1группе- 2) агглютинация произошла с сывороткой II и в (III) — кровь не дала агглютинации с одноименной сывороткой группы А(II), следовательно она относится к АСШ группе; 3) агглютинация произошла с сыворотками 0(1) А (II) групп, но не наступила с сывороткой одноименной группы В (III) — в этом случае кровь принадлежит к В (III) группе; 4) агглютинация имеется во всех трех стандартных сыворотках — исследуемая кровь содержит агглютиногены АВ и таким образом относится к AB(IV) группе.

При установлении АВ (IV) группы крови в целях отличия истинной агглютинации от панагглютинации рекомендуется помещать на тарелку каплю исследуемой крови, смешанной с физиологическим раствором (Н. И. Блинов). При панагглютинации склеивание эритроцитов наступает и в этой капле, к которой не прибавляется сыворотка. В данном случае необходимо дополнительно исследовать группу крови с помощью стандартных эритроцитов.

Методика определения групп крови и резус-фатора

Методика определения групп крови и резус-фатора

Рис. 2. Результаты определения групп краки с помощью трех стандартных сывороток.

Определение группы крови по стандартным эритроцитам при перекрестном способе исследования групп крови

Исследование производят на фарфоровой тарелке, где помещают 3 капли плазмы реципиента, полученной следующим образом: кровь из пальца смешивают с 4% раствором лимоннокислого натрия (1 часть раствора лимоннокислого натрия на 4 части крови), центрифугируют. Затем на тарелке три капли плазмы реципиента смешивают с маленькими каплями (с булавочную головку) стандартных эритроцитов 0(1), А(Н) и В(Ш) групп.

Методика определения групп крови и резус-фатора

Методика определения групп крови и резус-фатора

Рис. 3. Результаты определения груш крови с помощью стандартных эритроцитов.

Придерживаются общего правила — эритроцитов по объему берут в несколько раз меньше, чем сыворотки (или плазмы); после смешивания эритроцитов с сывороткой в течение 5 минут к каждой капле прибавляют
1—2 капли физиологического раствора.

Результаты реакции при определении групп крови по
стандартным эритроцитам представлены на рис. 3.

В том случае, если кровь принадлежит к 0(1) группе, реакция со стандартными эритроцитами 0(1) группы будет отрицательной, а со стандартными эритроцитами А(П) и В(III) групп — положительной. Таким образом, испытуемая сыворотка содержит с- и р. -агглютинины и принадлежит к группе 0(1).

У людей с группой крови А(II) реакция агглютинации со стандартными эритроцитами 0(1) и А(II) не происходит,

а с эритроцитами В (III) она наступает. В данном случае в испытуемой сыворотке имеется агглютинин Р и нет агглютинина а. Сыворотка принадлежит к группе А(II).

При наличии В(Ш) группы крови реакция агглютинации со стандартными эритроцитами группы 0(1) и В(III) отсутствует, а в капле с эритроцитами А(II) она имеется. Таким образом, в испытуемой сыворотке имеется агглютинин а, но нет агглютинина (Т Сыворотка принадлежит к группе В(III).

У людей с группой крови AB(IV) во всех трех каплях реакция отрицательна. Испытуемая сыворотка не содержит агглютининов и относится к группе AB(IV).

Перекрестное определение групп крови

Перекрестное определение групп крови производят одновременно по стандартным сывороткам и по стандартным эритроцитам.

Двойной метод реакции изогемагглютивации более сложен, чем простой, однако он является более точным и поэтому должен применяться в институтах и на станциях переливания крови при первичном отборе доноров, а также во всех случаях, где реакция агглютинации со стандартными сыворотками вызывает какие-либо сомнения.

Определение подгрупп Ai и А2. Существует несколько способов выделения подгрупп Ai и А2 группы А(Н). Из них наиболее простым является способ определения подгрупп с помощью специальной сыворотки. Эту сыворотку получают путем адсорбирования сыворотки В(III) эритроцитами подгруппы А2, которые поглощают излишек а — агглютинина. Эта сыворотка называется анти-Ai (Н. В. Попов).

Определение факторов М и N. Определение факторов М и N можно производить со специальной сывороткой, полученной путем иммунизации кроликов человеческими эритроцитами М и N.

Адсорбированные сыворотки анти-М и анти-N сохраняют свои качества в течение 6—7 месяцев.

Определение резус-фактора (Rh).

Определение резус-фактора проводится при помощи специально изготовленной резусотрицательной сыворотки. Последняя приготовляется из крови женщин, иммунизированных резус-фактором во время беременности, взятой после рождения ребенка с гемолитической желтухой. Сыворотку- антирезус можно получить от морских свинок, иммунизированных кровью обезьян Macaccus rhesus.

Кровь для исследования на резус-фактор берут обычным путем из вены или пальца, смешивают в пробирке с 4% раствором лимоннокислого натрия (один объем раствора лимоннокислого натрия на четыре части крови) и центрифугируют. Плазму сливают и эритроциты промывают два раза в физиологическом растворе, а затем смешивают с физиологическим раствором (2% смесь). После этого в маленькие пробирки, установленные на штативе, пастеровской пипеткой вводят по две капли сыворотки- антирезус и по одной капле 2% взвеси исследуемых эритроцитов.

Методика определения групп крови и резус-фатора

Методика определения групп крови и резус-фатора

Рис. 4. Схема определения факторов М и N.

После встряхивания пробирок их помещают в штатив и оставляют при температуре 20—37° в течение часа. Через час в лупу по вертикальной оси пробирки рассматривают осадок эритроцитов на дне пробирки.

Положительная реакция агглютинации (зазубренный, фестончатый кружок в виде «ватрушки», рис. 5) говорит о наличии в испытуемых эритроцитах резус-фактора, отсутствие агглютинации — об его отсутствии.

Методика определения групп крови и резус-фатора

Методика определения групп крови и резус-фатора

Рис. 5. Схема определения резус- фактора.

При сомнительных результатах исследование повторяют с другой серией антирезус-сыворотки.

Ошибки при определении групп крови

Определение групп крови должно проводиться очень тщательно, так как малейшее отклонение от существующих правил влечет за собой тяжелые, нередко роковые ошибки. Большинство осложнений и смертей, связанных с переливанием крови, является следствием технических ошибок, допущенных при определении групп крови. Значительно реже встречаются необычные, особые свойства крови больного или донора, которые также могут привести к неправильному определению группы крови.

Практическому врачу чрезвычайно важно знать все варианты возможных ошибок подобного рода и уметь их определять и предупреждать.

В основном ошибки при определении групп крови можно представить в следующем виде.

Ошибки при написании группы крови и групп стандартных сывороток.

Эти ошибки встречались в первые годы распространения метода пере ливания крови чаще, чем теперь, потому что зависели от множества классификаций (Гиршфельд, Янский, Мотч и т. д.). Однако и в настоящее время они могут имен, место и поэтому каждый врач, определяющий группу крови, должен лично четко записать ее в историю болезни

Ошибки, зависящие от неправильной техники определения групп крови.

Такие ошибки происходят, когда определение групп крови ведется не на тарелках, при недостаточном освещении, в случае несоблюдения пропорции сыворотки и крови (необходима пропорция: 1 часть крови на 10—15 частей сыворотки), при высыхании сыворотки или капли крови на тарелке, при несоблюдении правила всегда встряхивать, перемешивать и прибавлять к исследуемой крови каплю физиологического -раствора, загрязнении стеклянных палочек, которыми производится смешивание крови и сыворотки, недостаточном сроке выжидания реакции изогемагглютинации и т. д.

Все эти ошибки легко предупреждаются, если соблюдать изложенные выше правила определения групп крови. При этом следует обращать внимание на так называемую псевдоагглютинацию — склеивание эритроцитов в «монетные столбики», которые растворяются физиологическим раствором, а также при встряхивании тарелки.

Ошибки, зависящие от определения групп крови в холодной (ниже 12°) и слишком теплой (вы ш е 30°) атмосфер е. Такие ошибки также считаются техническими. При исследованиях групп крови в помещении с температурой воздуха ниже 12° происходит склеивание эритроцитов в виде кучек, весьма напоминающее агглютинацию. Эта агглютинация называется холодной. Для предупреждения ее следует производить определение групп крови при температуре выше 12°.

Прибавление физиологического раствора также способствует ликвидации феномена холодной агглютинации.

При исследовании групп крови в чрезмерно теплом помещении (свыше 30°) агглютинация может совсем не наступить или ее появление бывает очень задержано.

В этих случаях нередко делается неправильное заключение о принадлежности исследуемой крови к 0(1) группе.

Предупредить подобные ошибки можно при использовании и-скусственно-гр охлаждения (в .местностях с жарким климатом необходимо определять группы крови рано утром или вечером, при естественном снижении температуры), а также путем проверки группы крови двойной реакцией (описание см. выше).

Феномен Томсена —агглютинация, зависящая от воздействия на эритроциты особого вида бактерий при загрязнении исследуемой крови. Предупреждение ее состоит в соблюдении правил асептики.

Ошибки, зависящие от низкой агглютинабильности фактора А2 при исследовании крови А(II) и АВ (IV) -групп. П-о данным Н. И. Блинова, эти ошибки встречаются чаще всех остальных. При недостаточном выжидании реакции агглютинации в этих случаях может не произойти, и врач дает ошибочное заключение о наличии 0(1) группы. Вот почему особенно тщательно нужно исследовать А(II) и АВ (IV) группы крови и при малейшем сомнении прибегать к двойной реакции.

Во всех случаях необходимо выжидать появления -реакции агглютинации точно 5 хминут и только по истечении 5 минут делать заключение о группе исследуемой крови.

П а н а г г л ю т и н а ц и я

— склеивание эритроцитов со своей сывороткой, физиологическим раствором и т. д., а также способность сыворотки склеивать все эритроциты, в том числе своей крови. По Н. И. Блинову, панагглютинация встречается у доноров в 0,07% случаев и может со временем у них исчезать. Чаще всего -она встречается у лиц, имеющих кровь 0(1) группы. Причина панагглютинации не установлена. Она может наблюдаться у здоровых и больных людей, независимо от пола и возраста.

Панагглютинация появляется через несколько -секунд, но постепенно к 5 минутам ослабевает (Н. И. Блинов), что отличает ее от нормальной, при которой наблюдается — постепенное усиление агглютинации.

Панагглютинация может иметь . место обычно в том случае, когда в трех каплях -появляется быстрое склеивание эритроцитов.

Поэтому во всех случаях перед тем как написать АВ (IV) группу крови следует рядом с тремя каплями (во всех каплях имеется агглютинация) поместить четвертvю каплю исследуемой крови и смешать с каплей физиологического раствора. В случае наличия панагглютинации в этой четвертой капле без стандартной сыворотки произойдет склеивание эритроцитов (Н. И. Блинов).

Наконец, могут иметь место ошибки в определении групп крови, зависящие от высыхания капли сыворотки и 5рови В результате образуются мелкие зернышки, которые симулируют реакцию агглютинации. Эту ошибку можно предупредить, сокращая промежутки между помещением капель на тарелке и прибавлением к ним крови.     ,

В.ОК. 30.10.2016г.

ОПТ. ОК. 30.10.2016г.

 

Комментарии:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован.